PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

The efficiency of a culture system is related to the elaboration and replacement of a medium with conditions suitable for follicular development. Recent investigations suggested that in vitro culture medium should be replaced after specific time periods in various species. However, the suitable interval for the exchange of in vitro culture medium has not yet been established in equine species. The objective of this investigation was to evaluate the effect of medium exchange intervals of 24 hours (T24) or 48 hours (T48) for in vitro culture of preantral follicles at 2 or 6 days. At the end of the culture period, the fragments were processed using classical histology. Equine preantral follicles were classified according to morphological integrity and developmental stage. Data analysis was performed using Fisher’s test with a significance level of p<0.05. Out of a total of 399 follicles evaluated, 174 (43.6%) were primordial follicles, 225 (56.4%) were in development, and 63.76% were morphologically intact. In the in vitro culture performed over two days, there was no significant difference in relation to follicular integrity after medium replacement (p>0.05). Compared to the medium replacement at six days of culture, there was a statistically significant difference for T24 (68.9%, p<0.05). Therefore, we suggest changing the medium for equine species at 48 hours after the start of culture followed by subsequent daily replacements.

• In vitro culture equine preantral follicles ovary horses culture in vitro period follicular morphology

Abstract in Portuguese:

A eficiência de um sistema de cultivo está relacionada à elaboração e substituição do meio de cultivo com condições adequadas ao desenvolvimento folicular. Pesquisas recentes sugerem que o meio de cultivo in vitro deve ser substituído após períodos de tempo específicos para várias espécies. No entanto, o intervalo adequado para a troca de meio de cultivo in vitro ainda não foi estabelecido na espécie equina. O objetivo desta investigação foi avaliar o efeito de intervalos de troca média de 24 horas (T24) ou 48 horas (T48) para cultivo de folículos pré-antrais aos 2 ou 6 dias. No final do período de cultivo, os fragmentos foram processados usando histologia clássica. Os folículos pré-antrais equinos foram classificados de acordo com a integridade morfológica e o estágio de desenvolvimento. A análise dos dados foi realizada utilizando o teste de Fisher com um nível de significância de p<0,05. De um total de 399 folículos avaliados, 174 (43,6%) foram folículos primordiais, 225 (56,4%) estavam em desenvolvimento e 63,76% estavam morfologicamente intactos. No cultivo in vitro realizado ao longo de dois dias, não houve diferença significativa em relação à integridade folicular após a substituição do meio (p>0,05). Comparado com a substituição média aos seis dias de cultivo, houve diferença estatisticamente significativa para T24 (68,9%, p<0,05). Portanto, sugerimos alterar o meio para as espécies equinas às 48 horas após o início da cultura, seguindo as subsequentes substituições diárias.

• Cultivo in vitro folículos pré-antrais equinos ovário período de cultivo in vitro morfologia folicular

Abstract in English:

ABSTRACT.- Jimenez C.R., Penitente-Filho J.M., Torres C.A.A., Medeiros A.M. & Silva L.S. 2016. Vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide and sucrose plus &#945;-tocopherol. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):209-215. Laboratório de Nutrição Animal, Centro de Energia Nuclear a Agricultura, Universidade de São Paulo, Av. Centenário 303, Cx. Postal 96, Piracicaba, SP 13400-970, Brazil. E-mail: zoocaro@hotmail.com The objective of this study was to evaluate the vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide (D) and sucrose (S) plus &#945;-tocopherol 5mmol/L (T5) or 10mmol/L (T10) and, evaluate the thawed with minimal essential medium (m) with or without sucrose (s). Ovaries of cows were collected from slaughterhouse for the experiment I (n=66) and II (n=51). In the laboratory ovarian fragments were randomly assigned either to fresh control and 8 vitrification treatments (Controle and Dm; Dms, DSm; DSms; DST5m; DST5ms; DST10m; DST10ms). Ovarian fragments were placed in vitrification solution (5 min) and immersed in liquid nitrogen (-196°C), after a week, the fragments were thawed and analyzed. In the experiments I, preantral follicles were morphologically observed for histological evaluation, (normal; degenerated and developing of stage). In the experiment II, preantral follicles were mechanically isolated from ovarian tissue and examined with trypan blue, where dead and live corresponded to stained or non-stained. The treatments DSm, DSms and DST10m were effective in preserving the morphology in situ. However, the viability of isolated preantral follicles after vitrification remained high only in treatment DST10m. Thus, DST10m preserves survival rates and morphological integrity during vitrification of bovine preantral follicles.

• Vitrification follicles sucrose plus α-tocopherol dimethylsulfoxide oocyte vitrificação folículos dimetilsulfóxido criopreservação oócito

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Jimenez C.R., Penitente-Filho J.M., Torres C.A.A., Medeiros A.M. & Silva L.S. 2016. Vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide and sucrose plus &#945;-tocopherol. [Vitrificação de folículos pré-antrais bovinos com dimetilxulfoxido e sacarose adicionado de &#945;-tocopherol.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):209-215. Laboratório de Nutrição Animal, Centro de Energia Nuclear a Agricultura, Universidade de São Paulo, Av. Centenário 303, Cx. Postal 96, Piracicaba, SP 13400-970, Brazil. E-mail: zoocaro@hotmail.com Os objetivos deste estudo foram avaliar a vitrificação de folículos pré-antrais bovinos com dimetilsulfóxido (D) e sacarose (S) adicionando &#945;-tocoferol 5mmol/L (T5) ou 10mmol/L (T10) e, avaliar o aquecimento com meio essencial mínimo (m) com ou sem sacarose (s). Ovários de fêmeas bovinas foram coletados de abatedouro, para o experimento I (n= 66) e II (n= 51). No laboratório fragmentos ovarianos foram distribuídos aleatoriamente para o controle fresco e 8 tratamentos de vitrificação (Controle e Dm; Dms, a DSm; DSms; DST5m; DST5ms; DST10m; DST10ms). Os fragmentos ovarianos foram colocados na solução de vitrificação (5 min) e imersos em nitrogênio líquido (-196°C). Após uma semana os fragmentos foram aquecidos e analisados. No experimento I, folículos pré-antrais foram observados morfologicamente para avaliação histológica (normal, degenerados e estádio de desenvolvimento). No experimento II, folículos pré-antrais foram mecanicamente isolados do tecido ovariano e examinados com o azul de trypan, observando mortos e vivos corados e não corados respetivamente. Os tratamentos a DSm, DSms e DST10m foram eficazes na preservação da morfologia in situ. No entanto, a viabilidade de folículos pré-antrais isolados após a vitrificação manteve-se elevada apenas no tratamento DST10m. Assim, DST10m preservou as taxas de sobrevivência e integridade morfológica durante a vitrificação de folículos pré-antrais bovinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Costa S.L., Costa E.P., Pereira E.C.M., Benjamin L.A., Rodrigues M.T., Mendes V.R.A. & Silva T.F. 2014. Influence of Insulin-like Growth Factor I (IGF-I) on the survival and the in vitro development of caprine preantral follicles. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(10):1037-1044. Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas e da Saúde, Laboratório de Maturação de Ovócitos e Fertilização In Vitro, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E-mail: sanelylc@hotmail.com The aim of this study was to investigate the effects of the insulin-like growth factor -I (IGF-I) on survival, activation (transition from primordial to primary follicles) and growth of caprine preantral follicles cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex were cultured for one and seven days in the absence or presence of IGF-I (0, 50 and 100ng/ml). The non-cultured and cultured tissues were processed and analyzed by histology and transmission electron microscopy. The culture for one day in a medium with 100ng/ml of IGF-I showed 86.7% of morphologically normal follicles. These results were similar (P>0.05) to the percentage of normal follicles found in the control (96.7%). It was also found that this medium increased the percentage of follicular activation (developing follicles) with one day of culture. The oocyte and follicular diameters remained similar to the control by culturing for one day in a medium containing 100ng/ml of IGF-I. The ultrastructural analysis did not confirm the integrity of the follicular fragments in a medium containing IGF-I (100ng/ml) after one and seven days of culture. In conclusion, this study demonstrated that the addition of 100 ng/ml of IGF-I in the culture medium enables the development of preantral follicles of goats with one day of culture. However, it is not sufficient to maintain the follicular integrity and the follicular survival rate after seven days of culture.

• Preantral follicles ovary folículos pré-antrais ovário

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Costa S.L., Costa E.P., Pereira E.C.M., Benjamin L.A., Rodrigues M.T., Mendes V.R.A. & Silva T.F. 2014. Influence of Insulin-like Growth Factor I (IGF-I) on the survival and the in vitro development of caprine preantral follicles. [Influência do Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) sobre a sobrevivência e o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(10):1037-1044. Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas e da Saúde, Laboratório de Maturação de Ovócitos e Fertilização In Vitro, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E-mail: sanelylc@hotmail.com O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do fator de crescimento semelhante a insulina-I (IGF-I) na sobrevivência, ativação (transição de folículos primordiais para primários) e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de córtex ovariano foram cultivados por um e sete dias na ausência ou presença de IGF-I (0, 50 e 100ng/mL). Os tecidos não cultivados e cultivados foram processados e analisados por histologia e microscopia eletrônica de transmissão. O cultivo por um dia em meio com 100ng/mL de IGF-I apresentou 86,7% de folículos morfologicamente normais. Estes resultados foram semelhantes (P>0,05) ao percentual de folículos normais encontrados no controle (96,7%). Verificou-se ainda que este meio aumentou o percentual de ativação folicular (folículos em desenvolvimento) com um dia de cultivo. Os diâmetros ovocitário e folicular mantiveram-se semelhantes ao controle ao cultivar por um dia em meio contendo 100ng/mL de IGF-I. As análises ultraestruturais não confirmaram a integridade folicular dos fragmentos em meio contendo IGF-I (100 ng/mL) após um e sete dias de cultivo. Em conclusão, esse estudo demonstrou que a adição de 100 ng/mL de IGF-I no meio de cultivo ativa o desenvolvimento de folículos pré-antrais de caprinos com um dia de cultivo. Entretanto, não é suficiente para manter a integridade folicular e a taxa de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Lima-Verde I.B., Matos M.H.T., Celestino J.J.H., Rossetto R., Name K.P.O., Báo S.N., Campello C.C. & Figueiredo J.R. 2012. Progesterone and Follicle Stimulating Hormone interact and promote goat preantral follicles survival and development in vitro. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):361-367. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-Antrais, Universidade Estadual do Ceará, Av. Paranjana 1700, Campus do Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brazil. E-mail: isabel_limaverde@yahoo.com.br We investigated the effects of progesterone and follicle stimulating hormone (FSH) on survival and growth of caprine preantral follicles. Pieces of ovarian tissue were cultured for 1 or 7 days in minimum essential medium (MEM) alone or containing progesterone (1, 2.5, 5, 10 or 20ng/mL), FSH (50ng/mL) or the interaction between progesterone and FSH. Fresh (non-cultured control) and cultured ovarian tissues were processed for histological and ultrastructural studies. After 7 days the addition of FSH to all progesterone concentrations maintained the percentage of normal follicles similar to fresh control. At day 7 of culture, a higher percentage of developing follicles was observed only in 2.5ng/ml of progesterone associated with FSH or 10ng/ml of progesterone alone when compared with control. From day 1 to day 7 of culture, a significant increase in the percentage of developing follicles was observed in MEM and 2.5ng/ml of progesterone + FSH. In addition, after 7 days, in all treatments, there was a significant increase in follicular diameter when compared with control, except for MEM alone and in 5ng/ml of progesterone + FSH or 10ng/ml of progesterone alone. Ultrastructural studies confirmed follicular integrity after 7 days of culture in 2.5ng/ml of progesterone with FSH. In conclusion, this study demonstrated that the interaction between progesterone and FSH maintains ultrastructural integrity, stimulates primordial follicles activation and further growth of cultured caprine preantral follicles.

• Progesterone follicle stimulating hormone Progesterona hormônio folículo-estimulante

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Lima-Verde I.B., Matos M.H.T., Celestino J.J.H., Rossetto R., Name K.P.O., Báo S.N., Campello C.C. & Figueiredo J.R. 2012. Progesterone and Follicle Stimulating Hormone interact and promote goat preantral follicles survival and development in vitro. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):361-367. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-Antrais, Universidade Estadual do Ceará, Av. Paranjana 1700, Campus do Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brazil. E-mail: isabel_limaverde@yahoo.com.br Este trabalho verificou os efeitos da progesterona e do hormônio folículo-estimulante (FSH) na sobrevivência e no crescimento de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por 1 ou 7 dias em Meio Essencial Mínimo (MEM) sozinho ou contendo progesterona (1, 2.5, 5, 10 ou 20ng/mL), FSH (50ng/mL) ou a combinação entre esses dois hormônios. O tecido fresco (controle não-cultivado) e o cultivado foram processados para análise histológica e ultra-estrutural. Após 7 dias a adição de FSH a todas as concentrações de progesterone manteve o percentual de folículos normais similar ao controle fresco. No dia 7 de cultivo, um alto percentual de folículos em desenvolvimento foi observado somente no tratamento com 2,5ng/ml de progesterona associada ao FSH ou com 10ng/ml de progesterona sozinha, em relação ao controle fresco. Do dia 1 para o dia 7 de cultivo, um aumento significativo no percentual de folículos em desenvolvimento foi observado no MEM sozinho e adicionado de 2,5ng/ml de progesterona + FSH. Além disso, após 7 dias, em todos os tratamentos, houve um aumento significativo no diâmetro folicular em relação ao controle, exceto nos tratamentos com MEM sozinho, 5ng/ml de progesterona + FSH ou 10ng/ml de progesterona sozinha. A análise ultra-estrutural confirmou a integridade follicular após 7 dias de cultivo no tratamento com 2,5ng/ml de progesterona + FSH. Em conclusão, este estudo demonstrou que a interação entre progesterona e FSH mantém a integridade ultra-estrutural, estimula a ativação de folículos primordiais e o posterior crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Araújo V.R., Silva C.M.G., Magalhães D.M., Silva G.M., Báo S.N., Silva J.R.V., Figueiredo J.R. & Rodrigues A.P.R. 2010. Effect of Bone Morphogenetic Protein-7 (BMP-7) on in vitro survival of caprine preantral follicles. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(4):305-310. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-Antrais, Universidade Estadual do Ceará, Av. Paranjana 1700, Campus do Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brazil. E-mail: val_exclusiva@yahoo.com.br This study was conducted in order to verify the effect of different concentrations of BMP-7 in the in vitro survival and development of caprine preantral follicles. Fragments of caprine ovarian cortical tissue were cultured for 1 or 7 days in Minimum Essential Medium (MEM+) supplemented with different concentrations of BMP-7 (1, 10, 50 or 100ng/ml). Non-cultured fragments or those cultured for 1 or 7 days were processed for classical histology and transmission electron microscopy (TEM). Parameters such as follicular survival, activation and growth were evaluated. The results showed that, after 1 or 7 days of culture, the percentage of morphologically normal follicles was significantly reduced in all treatments when compared with fresh control, except at 1ng/ml of BMP-7 for 1 day. In addition, the concentration of 10ng/ml of BMP-7 significantly increases follicular diameter from day 1 to 7 of culture. There was no influence of the other concentrations of BMP-7 regarding to the follicular and oocyte diameter. Ultrastructure studies confirmed follicular integrity after 7 days of culture in 1ng/ml BMP-7. In conclusion, small concentrations of BMP-7 can improve the survival and growth of caprine preantral follicles during in vitro culture.

• Ovary preantral follicles bone morphogenetic protein-7 ovário folículos pré-antrais proteína morfogenética óssea 7

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Araújo V.R., Silva C.M.G., Magalhães D.M., Silva G.M., Báo S.N., Silva J.R.V., Figueiredo J.R. & Rodrigues A.P.R. 2010. Effect of Bone Morphogenetic Protein-7 (BMP-7) on in vitro survival of caprine preantral follicles. [Efeito da Proteína Morfogenética Óssea 7 (BMP-7) para a sobrevivência in vitro de folículos pré-antrais caprinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(4):305-310. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-Antrais, Universidade Estadual do Ceará, Av. Paranjana 1700, Campus do Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brazil. E-mail: val_exclusiva@yahoo.com.br O presente trabalho foi conduzido de modo a se verificar o efeito de diferentes concentrações da BMP-7 no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos de tecido cortical ovariano caprino foram cultivados por 1 ou 7 dias em Minimum Essential Medium (MEM+) suplementado com diferentes concentrações de BMP-7 (1, 10, 50 ou 100ng/ml). Os fragmentos não cultivados ou aqueles cultivados por 1 ou 7 dias foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão (TEM), sendo avaliados parâmetros morfológicos indicativos de viabilidade, ativação e crescimento. Os resultados mostraram que o percentual de folículos morfologicamente normais diminuiu significativamente em todos os tratamentos quando comparados ao controle, exceto na concentração de 1ng/ml por 1 dia de cultivo. Já no D7 todos os tratamentos reduziram significativamente os percentuais de folículos morfologicamente normais. Utilizando 10ng/ml de BMP-7 foi observado um aumento significativo no diâmetro folicular quando comparados os diferentes períodos de cultivo. Não houve influência das demais concentrações de BMP-7 quando avaliados além do diâmetro folicular o diâmetro oocitário. A análise por TEM confirmou a integridade ultra-estrutural nos folículos após 7 dias de cultivo com 1ng/ml de BMP-7 . Em conclusão, o BMP-7 em baixas concentrações pode melhorar a sobrevivência e o crescimento durante o cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos.